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跟著小編一起來(lái)看看如何讓細(xì)胞復(fù)蘇
  • 發(fā)布日期:2020-01-09      瀏覽次數(shù):1068
    •    跟著小編一起來(lái)看看如何讓細(xì)胞復(fù)蘇
        細(xì)胞復(fù)蘇的原則——快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對(duì)細(xì)胞造成損害。
        具體操作
       ?。ㄒ唬?shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
        1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃
        2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。
        3.在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過(guò)毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。
       ?。ǘ┤〕鰞龃婀埽?/div>
        1.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號(hào)。
        2.從液氮罐中取出細(xì)胞盒,取出所需的細(xì)胞,同時(shí)核對(duì)管外的編號(hào)。
       ?。ㄈ┭杆俳鈨觯?/div>
        1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動(dòng),使管中的液體迅速融化。
        2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺(tái)內(nèi)。
       ?。ㄋ模┢胶怆x心:
        細(xì)胞用架盤(pán)天平平衡后,放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min
        (五)制備細(xì)胞懸液:
        1.吸棄上清液。
        2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液,吹打制成細(xì)胞懸液。
       ?。┘?xì)胞計(jì)數(shù):
        細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜。
       ?。ㄆ撸┡囵B(yǎng)細(xì)胞
        將復(fù)合細(xì)胞計(jì)數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),將培養(yǎng)瓶放入37℃和5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(shí)(或者24-48小時(shí))后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液的時(shí)間由細(xì)胞情況而定。
        初學(xué)者易犯錯(cuò)誤:
        1水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。
        2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多,導(dǎo)致傳熱不佳,使融化時(shí)間延長(zhǎng)。
        3.離心前忘記平衡,導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失。
        4.一次復(fù)蘇細(xì)胞過(guò)多,忘記更換吸頭和吸管,導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。
    魏經(jīng)理
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