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1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動(dòng),使管中的液體迅速融化。
2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺(tái)內(nèi)。
?。ㄋ模┢胶怆x心:
細(xì)胞用架盤(pán)天平平衡后,放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min
(五)制備細(xì)胞懸液:
1.吸棄上清液。
2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液,吹打制成細(xì)胞懸液。
?。┘?xì)胞計(jì)數(shù):
細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜。
?。ㄆ撸┡囵B(yǎng)細(xì)胞
將復(fù)合細(xì)胞計(jì)數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),將培養(yǎng)瓶放入37℃和5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(shí)(或者24-48小時(shí))后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液的時(shí)間由細(xì)胞情況而定。
初學(xué)者易犯錯(cuò)誤:
1水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。
2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多,導(dǎo)致傳熱不佳,使融化時(shí)間延長(zhǎng)。
3.離心前忘記平衡,導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失。
4.一次復(fù)蘇細(xì)胞過(guò)多,忘記更換吸頭和吸管,導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。