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思拓凡Cytiva(原GE生命科學(xué))的預(yù)裝柱和填料是做蛋白純化經(jīng)常會用到的產(chǎn)品,預(yù)裝柱主要分以下幾種
一、吸附式層析(親和,離子,疏水)通常柱型比較短粗,柱型有HiTrap 1ml(7/25),HiTrap 5ml(16/25),HiPrep 20ml(16/100),HiScreen 4.7ml(7.7/100)幾種。
1、HiTrap柱型
HiTrap是常用的1ml和5ml柱型。柱高都是相同的25mm,1ml的柱子內(nèi)徑為7mm,5ml的柱子內(nèi)徑為16mm。1ml和5ml柱型的選擇可以根據(jù)柱子的載量來選擇。通過查找手冊可以查到預(yù)裝柱每ml填料可以結(jié)合多少蛋白,5ml的柱子可以結(jié)合5倍的蛋白。HiTrap預(yù)裝柱也可以通過2-3根首尾串聯(lián)從而增加上樣量。
2、HiPrep柱型
HiPrep選用了比HiTRap更大體積的柱型以增加上樣量。HiPrep的柱體積為20ml,柱子內(nèi)徑為16mm,高度為100mm。
3、HiScreen柱型
HiScreen柱型的體積為4.7ml,內(nèi)徑為7.7cmm,柱高100mm。主要用于工藝平臺的方法優(yōu)化和方案篩選。柱床高度為10cm,通過串聯(lián)可以達到20cm。較小的柱型有效降低優(yōu)化階段樣品的消耗和時間成本,并且在生產(chǎn)中通過放大柱子內(nèi)徑而不改變高度的方法,可以將參數(shù)有效放大至大體積工業(yè)生產(chǎn)中。
二、分子篩的柱型通常比較瘦長。由于是非吸附式層析,分子篩的上樣量一般為柱體積的2%-5%。分子篩的柱型有24ml(10/300),3ml(5/150),3ml(3.2/300),120ml(16/600),320ml(26/600)。
1、高分辨率半制備型24ml(10/300)
10/300為常規(guī)純化中常用柱型。柱體積為24ml,內(nèi)徑為10mm,柱高300mm。推薦上樣量為25-500ul。Superdex Increase采用10/300的柱型,9um粒徑,在保持較高上樣量的同時,具有超高分辨率。
2、高分辨率小規(guī)模3.2/300
3.2/300具有和10/300相同的柱高和較小的內(nèi)徑。柱體積為3ml,內(nèi)徑和柱高分別為3.2mm和300mm。推薦上樣量范圍為4-50ul。采用更小柱體積有利于減少樣品和緩沖液的損耗,并且減少樣品的稀釋。
3、快速篩選5/150柱型
5/150柱型具有更短的柱床高度。柱床體積為3ml,內(nèi)徑和柱高為5mm和150mm。推薦上樣量為4-50ul。更短的柱型有利于減少樣品和緩沖液的消耗,并且大大減少篩選時間。在幾分鐘內(nèi)即可得到有效結(jié)果。
4、大體積16/600和26/600
16/600柱體積為120ml,內(nèi)徑和柱高分別為16mm和600mm,最大上樣量為5ml。26/600柱體積為320ml,內(nèi)徑和柱高分別為26mm和600mm,最大上樣量為13ml。如果上樣量比較大,可以考慮這兩種柱型。