凍存管又稱菌種保存管、磁珠保存管、磁珠凍存管。微生物實(shí)驗(yàn)室常用的菌種保存方法有牛奶法、甘油法、斜面法等。復(fù)雜程度各異,效果也差別很大。目前國內(nèi)的大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都是實(shí)驗(yàn)人員自行制作菌種保存管,這不僅增大了工作強(qiáng)度,并且由于各種條件的限制,菌種保存效果不能總是令人滿意。所以,這就需要掌握好凍存管的使用方法和一些注意事項(xiàng),這樣才能起到很大的作用。
一、使用方法
1、使用凍存管儲(chǔ)存樣本時(shí),嚴(yán)格要求應(yīng)把凍存管放入液氮的氣相層或冰箱中保存。如果凍存管儲(chǔ)存于液氮液體中,液氮有一定幾率會(huì)滲入凍存管內(nèi)部,復(fù)蘇時(shí)液氮?dú)饣瘜?dǎo)致管內(nèi)外壓力不平衡,這樣極易造成凍存管的炸裂,并具有生物危害性。
2、操作凍存管復(fù)蘇,全程使用安全防護(hù)設(shè)備,建議穿實(shí)驗(yàn)服、戴棉質(zhì)手套且在安全的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上進(jìn)行操作。條件允許情況下,請佩戴護(hù)目鏡或防護(hù)面罩。由于夏季室內(nèi)溫度會(huì)高于冬季,請格外小心。
3、凍存細(xì)胞儲(chǔ)存過程中,凍存管的冷凍溫度須均勻。不均勻的受凍將會(huì)導(dǎo)致冰塞的產(chǎn)生,冰塞會(huì)抑制兩側(cè)的液體溫度傳遞進(jìn)而產(chǎn)生危險(xiǎn)的高壓力并導(dǎo)致凍存管受損。
4、凍存的樣本量不要超過凍存管要求的大工作體積。
二、注意事項(xiàng)
1、凍存管保存環(huán)境
未經(jīng)使用的凍存管可在室溫或2-8℃保存12個(gè)月;已經(jīng)接種的凍存管在-20℃保存,12個(gè)月內(nèi)可有良好的菌株保存效果;已經(jīng)接種的凍存管在-80℃保存,24個(gè)月內(nèi)可有良好的菌株保存效果。
2、凍存管保存時(shí)間
未經(jīng)使用的凍存管可在室溫或2-8℃保存;已經(jīng)接種的凍存管在-20℃或-80℃保存。
3、凍存管的使用步驟
從細(xì)菌純培養(yǎng)物中挑取新鮮培養(yǎng)物配成大約為3-4麥?zhǔn)媳葷岫鹊木鷳乙航臃N與菌種保存管中;擰緊保存管,來回顛倒4-5次使細(xì)菌乳化,不能旋搖;把保存管放入冰箱保存(-20℃--70℃
三、重要提醒
1、需在生物安全柜中操作,確保操作的無菌,確保菌株不被污染。
2、凍存管中小瓷珠的顏色可能有所不同,這不代表任何產(chǎn)品功能的不同,只是方便用戶進(jìn)行細(xì)菌編碼、標(biāo)記。
3、在接種之前有如下情況產(chǎn)生,該凍存管不得使用:
a. 瓶子有漏液情況發(fā)生。
b. 凍存管內(nèi)的凍存保護(hù)液混濁(說明已經(jīng)被污染)。
c. 超過有效保存期。
4、小瓷珠一旦從凍存管中取出,不得以任何原因再放回凍存管中。
5、當(dāng)丟棄使用過的或部分使用過的凍存管時(shí),應(yīng)注意生物危害的預(yù)防。