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近日，腫瘤期刊《Future Oncology》發(fā)表的一篇題為“The clinicopathological features and prognosis of tumor MSI in East Asian colorectal cancer patients using NCI panel”文章，通過(guò)對(duì)東亞結(jié)直腸癌（CRC）患者不同MSI檢測(cè)位點(diǎn)進(jìn)行對(duì)比，確定出MSI檢測(cè)Panel，并對(duì)東亞結(jié)直腸癌MSI發(fā)生率，臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性進(jìn)行分析總結(jié)。該研究由上海桐樹(shù)生物科技及相關(guān)2家臨床科研機(jī)構(gòu)共同完成，為MSI（微衛(wèi)星不穩(wěn)定性）在結(jié)直腸癌患者的診斷、臨床病理特征及預(yù)后意義等方面提供重要的臨床指導(dǎo)意義。
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本文研究人員采用兩種不同檢測(cè)位點(diǎn)測(cè)定MSI，并結(jié)合MMR蛋白免疫組化實(shí)驗(yàn)和多元變量分析，探究東亞CRC患者M(jìn)SI的發(fā)生狀況及臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性，研究主要得到以下發(fā)現(xiàn)：
●東亞CRC患者M(jìn)SI發(fā)生率略低于歐美人群，人群種族及基因多態(tài)性的不同，導(dǎo)致微衛(wèi)星重復(fù)系列存在差異。
●單核苷酸+雙核苷酸聯(lián)合Panel敏感性高于單純單核苷酸Panel，對(duì)于東亞裔CRC患者M(jìn)SI的檢測(cè)，單核苷酸+雙核苷酸聯(lián)合Panel更適合。
●東亞裔MSI的臨床病理特征與歐美人群基本一致，MSI-H好發(fā)于二期，近端、右半結(jié)腸部位，且分化較差伴有粘液成分的CRC患者。
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研究背景
結(jié)直腸癌（CRC）是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年約有 120 萬(wàn)名患者被確診為結(jié)直腸癌，而有超過(guò) 60 萬(wàn)名患者直接或間接死于結(jié)直腸癌。因此，結(jié)直腸癌已成為現(xiàn)階段威脅人類健康的重要疾病之一。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)及相關(guān)基因組學(xué)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)MSI在CRC的診斷和治療中扮演者極其重要的角色，如對(duì)CRC預(yù)后進(jìn)行判斷，指導(dǎo)5-氟尿嘧啶、伊立替康等化療藥物的反應(yīng)，幫助診斷篩選Lynch綜合征等，MSI已成為結(jié)直腸癌預(yù)后和臨床輔助治療過(guò)程中一個(gè)重要分子標(biāo)志物。
對(duì)于結(jié)直腸癌MSI的檢測(cè)，早在2004年，美國(guó)國(guó)立癌癥研究中心（NCI）頒布了貝塞斯達(dá)（Bethesda）標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)在MSI檢測(cè)位點(diǎn)的選擇上規(guī)定了兩種方式：2個(gè)單核苷酸（BAT-25、BAT-26）+3個(gè)雙核苷酸（D5S346、D2S123、D17S250）聯(lián)合位點(diǎn)的NCI Panel或者5個(gè)單核苷酸（BAT-25、BAT-26、NR21、NR22、NR24）單純位點(diǎn)的Pentaplex Panel。盡管這兩種Panel均能準(zhǔn)確的檢測(cè)MSI，但經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，二者在檢測(cè)內(nèi)對(duì)照設(shè)置、MSI-L篩查、MSI判定標(biāo)準(zhǔn)等方面仍存在一定的差異和優(yōu)劣勢(shì)。近年來(lái)，隨著MSI相關(guān)研究的不斷深入，有研究報(bào)道針對(duì)東亞裔CRC患者M(jìn)SI表型檢測(cè)采用2個(gè)單核苷酸+3個(gè)雙核苷酸的聯(lián)合Panel可能更為適合，但這種觀點(diǎn)需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。為此本研究以東亞裔CRC患者為研究對(duì)象，采用兩種不同的位點(diǎn)對(duì)MSI進(jìn)行檢測(cè)，并采用MMR蛋白免疫組化對(duì)兩種方法進(jìn)行評(píng)估，旨在為MSI的檢測(cè)、臨床病理及預(yù)后提供一定的理論依據(jù)。
研究方法
本研究以245例東亞結(jié)直腸癌患者為研究對(duì)象，其中直腸癌62例，左半結(jié)腸癌107例，右半結(jié)腸癌40例，其他類型（包括橫結(jié)腸癌、橫結(jié)腸-乙狀結(jié)腸癌、乙狀結(jié)腸癌等）36例。
采用PCR和IHC對(duì)患者M(jìn)SI和MMR蛋白進(jìn)行檢測(cè)，在PCR檢測(cè)MSI過(guò)程中，位點(diǎn)選擇采用NCI Panel 和Pentaplex Panel兩種檢測(cè)方法對(duì)患者的MSI進(jìn)行檢測(cè)，并用免疫組化實(shí)驗(yàn)評(píng)估MMR蛋白表達(dá)與兩種Panel檢測(cè)MSI間的一致性，同時(shí)通過(guò)多元變量分析MSI-H與臨床病理特征及相關(guān)基因突變信息的相關(guān)性，以此為CRC臨床診斷及預(yù)后評(píng)價(jià)提供更為完善的參考價(jià)值。
研究結(jié)果
1. MMR蛋白表達(dá)與MSI的相關(guān)性比較
目前，MMR蛋白的免疫組化分析（IHC）已成為臨床上檢測(cè)MSI的一種常用方法，通過(guò)檢測(cè)MLH1、MSH2、PMS2及 MSH6 4種蛋白表達(dá)，當(dāng)4種蛋白均為陽(yáng)性時(shí)，則判讀為MMR-I（MMR蛋白完整），如果其中一個(gè)蛋白表達(dá)缺失則判讀為MMR-D（MMR蛋白缺失）。本研究通過(guò)采用IHC對(duì)患者4種蛋白檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)共有28例患者為MMR-D，這28例患者12例（42.9%）為1個(gè)蛋白缺失，16例患者（57.1%）為兩個(gè)蛋白缺失。
對(duì)于MSI表型的檢測(cè)，我們分別采用NCI Panel和Pentaplex Panel兩種方法進(jìn)行檢測(cè)。在NCI Panel 檢測(cè)中我們發(fā)現(xiàn)有27例患者（11%）為MSI-H表型，2例患者（0.8%）為MSI-L表型，剩下216例患者（88.2%）為MSS表型；相比對(duì)于Pentaplex Panel檢測(cè)，結(jié)果顯示23例患者（9.4%）為MSI-H表型，1例患者（0.4%）為MSI-L表型，221例患者（90.2%）為MSS表型。值得注意的是，兩種方法均發(fā)現(xiàn)BAT-25、BAT-26是所有檢測(cè)位點(diǎn)中不穩(wěn)定的，檢測(cè)靈敏度均大于75%，如圖1。
圖1 兩種方法檢測(cè)5個(gè)MSI標(biāo)記位點(diǎn)的靈敏度和特異性
2. 不同方法測(cè)定MSI狀態(tài)的一致性比較
通過(guò)比較NCI Panel和Pentaplex Panel兩種方法的靈敏度和特異性（見(jiàn)表1），結(jié)果發(fā)現(xiàn)NCI Panel檢測(cè)的敏感性高于Pentaplex Panel檢測(cè)的敏感性，這提示NCI Panel檢測(cè)可能更適合于東亞裔患者。
表1 微衛(wèi)星標(biāo)記在無(wú)錯(cuò)配修復(fù)蛋白表達(dá)檢測(cè)中的預(yù)測(cè)值
采用MMR IHC對(duì)兩種Panel進(jìn)行評(píng)估（見(jiàn)表2，表3），結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與Pentaplex Panel相比，NCI Panel與dMMR的一致性可能更高（Kappa值0.898），這表明NCI Panel檢測(cè)能更好的反映MMR蛋白表達(dá)。
表2 免疫組化檢測(cè)MMR蛋白表達(dá)與NCI Panel檢測(cè)MSI間的一致性
表3 免疫組化檢測(cè)MMR蛋白表達(dá)與五個(gè)單核苷酸重復(fù)系列檢測(cè)MSI間的一致性
3. MSI-H與臨床病理特征
對(duì)于MSI-H與非MSI-H的患者進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)MSI-H患者與腫瘤分級(jí)、右側(cè)腫瘤位置、粘液組織類型相關(guān)，與患者年齡、TNM分期、BRAF突變、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移不相關(guān)。
4. MMR蛋白表達(dá)、MSI狀態(tài)與結(jié)直腸癌預(yù)后
本研究對(duì)245名患者進(jìn)行為期24個(gè)月的隨訪，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MSI-H患者相比MSS / MSI-L患者有更長(zhǎng)的無(wú)病生存期（DFS）（圖2），同樣，MMR蛋白表達(dá)缺失（MMR-D）患者較MMR蛋白表達(dá)完整（MMR-I）患者表型有有更長(zhǎng)的無(wú)病生存期（DFS）。以上結(jié)論表明MMR-D和MSI-H是CRC患者的兩個(gè)獨(dú)立預(yù)后因素。
圖2 MSI表型與患者DFS間關(guān)系
結(jié)論
MSI是CRC診斷和治療領(lǐng)域中一個(gè)非常重要的生物標(biāo)記物，可準(zhǔn)確反映CRC病理學(xué)特征，同時(shí)對(duì)CRC的治療如5-氟尿嘧啶化療響應(yīng)也能提供一定的指導(dǎo)，本研究采用兩種不同的方法對(duì)MSI進(jìn)行檢測(cè)比較，并分析MMR蛋白表達(dá)、MSI-H與結(jié)直腸癌預(yù)后間的關(guān)系，得到以下結(jié)論：
（1） 本研究采用NCI Panel對(duì)東亞CRC患者M(jìn)SI進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)MSI-H約占11%，這一比例較歐美CRC患者（MSI-H約8-20%）略低，這可能與*的臨床病例特征，種族差異及基因多態(tài)性相關(guān)。
（2） 采用NCI Panel 、Pentaplex Panel對(duì)MSI進(jìn)行檢測(cè)，其中NCI Panel檢測(cè)分析靈敏度似乎更高，同時(shí)與IHC測(cè)得的MMR比較，NCI Panel檢測(cè)的一致性也更好，這可能與兩種方法的內(nèi)對(duì)照，cut-off值及MSI發(fā)生核苷酸位點(diǎn)相關(guān)。
（3） 本研究再次證實(shí)MSI對(duì)CRC患者的預(yù)后有一定的指導(dǎo)意義，尤其是MSI-H患者，其無(wú)病生存期（DFS）較MSS/MSI-L患者更長(zhǎng)，因此MSI-H是CRC治療預(yù)后的一個(gè)有效的標(biāo)志物。
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